四、层析法
层析法也叫层离法，这种方法是利用中草药中所含各种化学成分因物理、化学性质的差异，当选择某一条件使各个成分随着展开剂流过支持剂或吸附剂时，各成分可彼此分离，然后在支持剂或吸附剂上经显色剂显色(或不须显色剂显色)，或在紫外光下产生一定颜色的荧光，获得一定的层析图谱，从而达到鉴定的目的。目前最普遠采用的是纸上层析法及薄层层析法两种。
1、纸上层析法用滤纸作支持剂。操作可分为垂直法和水平法两种。
垂直法通常是取层析滤纸一片(约5×20厘米)，先在滤纸一端约2.5厘米处用铅笔画一条起始线，用毛细管或微量注射器在线上点样，将已点样的滤纸条垂直悬挂于盛有展开剂的层析缸中，先使在展开剂的蒸汽中饱和一定时间，然后滤纸条下端放入展开剂中(不得淹没起始线)，上行展开，待展开接近滤纸前沿时，将滤纸条取出，并在溶剂前沿划线，干后在常光或紫外光下观察，或喷以显色剂后观察，分別记录所得色谱，测各组分的Rf值。
水平法(圆形径向层析)通常取圆形层析滤纸一张(直径约15厘米)，在中心画一直径约2厘米的圆圈，正中打一直径约5毫米小圆孔，依样品种类的多少将圆图分成若干等分，将样品液分别点在等分线上，干燥后在圆孔中插一滤纸芯，移至盛有展开剂的培养器中，滤纸芯浸在溶剂中，并盖以同样直径的培养皿，以进行层析。俟溶剂前沿移至距点样线约5厘米处，取出滤纸，干后在常光或紫外光下观察，或喷以显色剂观察色带。也可将单一样品点样，展开后，将层析纸根据拟试成分分成若干扇形小块，每一小块喷以选定的显色剂，然后加以鉴别，并将各块拼合起来进行综合分析。
2、薄层层析法是将氢氧化铝、硅胶或其它适宜物质为吸附剂，均匀地平舗一薄层在玻璃板上，把样品点加到薄层上，用适当溶剂展开，形成一定的色谱进行鉴定的方法。此法具有层析时间短、分离效果好、灵敏度高的优点。最常用的吸附剂是硅胶，可制成硅胶CMC(羧甲基纤维素钠)薄板，即取硅胶细粉(过200目算)和0.5～1％CMC水溶液以1：3-3.5的比例，调成糊状，舗于玻板上，干后于100℃活化30分钟，贮于干燥器中备用。采用CMC粘合薄层，机械强度牢，耐磨，可用铅笔书写，能经受一般化学试剂的处理。对于展开系统可根据具体情况灵活选用，以所得图谱的斑点圆整、清晰为好。显色采用的方法与纸上层析法相同。在层析鉴别中，如果对中草药所含成分已有一定的了解，宜将已知成分的化学纯品作为对照点样，并在同一条件下展开，进行层析对比鉴定，至于层析样品的制备，视具体情况而定，一般可考虑取药材粉末(5克左右或更少)，加10倍量蒸馏水煎煮30分钟，过滤，将滤液分成两份，一份加盐酸至pH3，另一份加碳酸钠溶液至pH11，分别以乙醚提取，回收乙醚后，加乙醇0.5毫升溶解，也可将中草药制备成10％浓度的乙醇提取液供点样用。
为了保证中草药的质量，对中草药所含有效成分已经研究清楚并可进行含量测定的，药典都有含量测定项目的规定，另有挥发油含量测定。对中草药的有效成分尚不清楚或尚无确切的含量测定方法，则可根据具体情况按照药典规定进行其它有关项目的检定，如浸出物测定等。另外对于控制药材质量有一定意义的，还有水分测定、灰分测定、杂质检查等。在整个中草药的鉴定过程中，要特别注意供鉴定药材取样的代表性，取样前，一般应先注意品名、产地、规格、等级及包装情况。取样时根据药材种类，形体大小及包件数，拣取一定数量(10～30％)的包件，从各个包件的不同部位或将药材倒出采用适宜的方法酌量取样。贵重药品应逐件抽样。一般药材取样量应不少于三次检验用量，并需留样以备复核。供鉴定的完整药材，一般先进行性状鉴定，然后根据具体情况，选做显微鉴定及理化鉴定。药材须经鉴定无误后，再进行其它项目的测定。
