苏木精和、-伊红染色法,简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色方法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与细胞质内的核酸着紫蓝色,伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。其特点:长期保存,不易产生沉淀和金属,应用范围广,可以用于组织石蜡切片,冰冻切片和组织细胞的染色等;苏木素染色液可以重复使用。
HE染色步骤实验步骤:
1、石蜡切片脱蜡至水。依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2、苏木素染细胞核。切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗。
3、伊红染细胞质。切片入伊红染液中染色1-3min。
4、脱水封片。将切片依次放入95%酒精Ⅰ5min-95%酒精Ⅱ5min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min,二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ,5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
5、显微镜镜检,图像采集分析。
注意事项:
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇应经常更换新液。
3、1%的盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和1%的盐酸乙醇分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。
4、乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。
5、冷冻切片染色时间尽量要短。
6、促蓝液常使用0.2~1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1~1%碳酸锂水溶液。7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、使用场所应通风,并远离火源。
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