色谱分离是基于分析物在极性流动相和非极性固定相之间的分配系数不同。最早的固定相是固体颗粒上涂有非极性液体。这些固定相很快被共价键的疏水基团取代，如二氧化硅载体上的十八烷基(C18)键合基团。
反相色谱的简化示意图如下所示，其中极性分析物首先被洗脱，而非极性分析物通过与疏水C18基团更强的相互作用而洗脱，疏水C18基团在固体硅胶载体周围形成“液体状”层。
反相色谱流动相通常使用甲醇或乙腈与水的混合物，分离的机制主要为疏水或“疏溶剂”相互作用。“疏溶剂相互作用”是指极性溶剂分子本身之间相互作力，以及水合分析物与非极性固定相的相互作用。
下图显示了三种有机成分的分离。尿嘧啶极性最大，高水溶性的化合物，首先洗脱。叔丁基苯由于与固定相的疏水相互作用增加，洗脱时间要晚得多。
反相色谱是最受欢迎的HPLC模式，70%以上的HPLC分析中使用。它适用于分析极性(水溶性)、中等极性和一些非极性分析物。反相色谱广泛用于纯度分析或稳定性指示分析，因为负责溶质保留的弱分散力可确保所有样品成分从柱上洗脱下来。
转载自：文亮频道
