1.概述
在反相液相色谱分析方法开发过程中，采用等度洗脱时，先洗脱组分的色谱峰峰宽较窄，后洗脱组分的色谱峰峰宽较宽；而梯度洗脱方式，则具有分析时间短(特别是对于样品组分复杂的情况来说)，在梯度范围内各色谱峰的峰宽近乎一致等特点。梯度洗脱时色谱峰纵向扩展可控特点，可参考下图1进行理解。
此外，鬼峰需要与梯度洗脱时由于梯度的突然变化引起的梯度峰进行区分，如下图4所示，在20min处由于梯度的陡然变化，造成流动相组成的急剧改变引起流动相折光特性发生很大的变化，而出现梯度峰(其峰形与所定的检测波长有关)。
在梯度洗脱模式下，可以通过避免突然大范围改变流动相的组成来避免尖锐的梯度峰的出现，同时也有助于减少泵的故障率。
2.1仪器流路及检测器引起的鬼峰
仪器流路中的残留气泡可以引起鬼峰，保留时间一般不可重现，即使流路中气泡连续存在，鬼峰出现的位置亦不可预测。可将流动相超声或鼓He脱除气泡并打开purge阀，大流速冲出仪器管路中的气泡，来减少气泡引起的鬼峰现象。
检测器处引入的鬼峰，多为一些样品组分在检测器流通池内的残留，其特点具有先后针之间的重复性差，或者没有重复性，色谱峰峰形特别尖锐类似大的毛刺。该种情形下，需要对流通池特别是石英视窗进行彻底清洗(联系工程师或者严格按照manual进行)。
混合器本身有时也会引入鬼峰，如下图所示同样的流动相，在系统流路的不同位置(分别为混合器前面与后面)添加污染物捕集装置，对基线进行监测如下图7所示。从图中可以明确看出混合器由于被污染而在色谱图上引入了鬼峰。
此外，同一台仪器经常在不同的流动相体系之间进行切换的时候，特别需要注意整个仪器管路内的污染物残留。当怀疑仪器流路内壁被残留物污染时，可用水：乙腈：异丙醇：甲醇=1：1：1：1的比例，以1mL/min的流速冲洗整个流路2h以上，可将流路内的污染物残留冲洗完全。
2.2样品制备以及自动进样引入的鬼峰
由样品制备引入的鬼峰，多集中与使用了不干净被污染的溶剂或者不干净的进样小瓶(如下图8)。
此外，由自动进样器引入的鬼峰，也不在少数。自动进样器进样的流程(如下图9)所示。在进样之后，部分样品溶液残留在进样针头以及针座之上，对下次进样别的样品的结果产生干扰，出现鬼峰。对于一些强吸附性组分，尽管进行程序洗针，有时依然可能会引入鬼峰。
2.3流动相引入的鬼峰
其中水相引入的鬼峰是最常见的，水中含有的有机，无机杂质均有可能对检测结果产生干扰，出现鬼峰。水相引入鬼峰的可能原因有：水中本来含有的有机，无机杂质；水相在使用过程中有尘埃或者空气中的有机物落入或溶解进去；水相在存放或使用的过程中，细菌等微生物滋生等。
有机相如甲醇，乙腈，四氢呋喃等，亦有可能引入鬼峰(如上图10所示)。有机相引入的鬼峰，原因多为有机相使用完之后未更换新的流动相瓶，而是直接添加补充的方式；以及流动相长期使用过程中从实验环境中富集来的污染物。
在使用有机酸碱添加剂以及缓冲盐的时候，鬼峰则可能是由于添加剂以及缓冲盐引入的(如下图12)，因此在实际使用时，需要使用HPLC级别的添加剂以及缓冲盐，并在条件允许的情况下，对比不同厂家选择最好的。
2.4其他引入的鬼峰
2.5如何应对鬼峰
捕集装置的安装位置不同，消除鬼峰干扰的效果也不同，如上图中e处位置的捕集效果要好于d处，但若混合器是干净的，两处的效果则是等效的。在泵后使用杂质捕集装置，系统压力会随着污染物在捕集装置上的积累而逐渐增加，因此需要定期更换。
而对于使用有机酸碱添加剂或者缓冲盐流动相的含量或放行分析方法，也可以通过改变梯度程序，将鬼峰与主峰的出峰位置最大程度地拉开，避免鬼峰对于样品组分含量测定结果的影响。
3.结论
BruceLee
作者公众号：Pharma_Analytical
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