这种微阵列芯片是基于金标银染并结合不对称PCR的裸眼可读的基因芯片,可以用于检测非洲猪瘟病毒,猪乙型脑炎病毒,高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒,猪圆环病毒和伪狂犬病毒五种病毒。目前这五种病毒在中国均已经在中国确诊。
8月3日,中国首例非洲猪瘟病毒在沈阳确诊。近年来,越来越多的猪流行病在中国出现和蔓延,而检测每一种病毒需要耗费大量的财力,物力,人力和精力。
我国科研人员基于金标银染并结合不对称PCR设计了一款微阵列芯片,可以用于检测非洲猪瘟病毒,猪乙型脑炎病毒,高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒,猪圆环病毒和伪狂犬病毒五种病毒。目前这五种病毒在中国均已经在中国确诊。
微阵列芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物(如玻片、尼龙膜等载体)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子反应,通过特定的仪器,比如激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄影像机对反应信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量的一种科学的仪器。
研究人员基于扩增区域内部靶基因序列设计了寡核苷酸探针,并且标记了它的氨基,目的是使得其能够共价结合在醛基修饰的玻璃表面上。寡核苷酸探针将作为捕获探针以结合补体生物素化的靶基因。接着,他们将纳米金偶联的链霉抗生物素蛋白引入与生物素特异性结合的微阵列芯片中,纳米金上沉淀的银产生的黑色的微阵列斑点图像肉眼可见。
为了提高视觉微阵列的杂交效率,研究人员优化了微阵列的参数,并通过不对称PCR制备了丰富的生物素化的单链靶DNA。此外,研究人员对微阵列的特异性,灵敏度,保质期和临床应用也进行了评估。
结果表明,探针与靶基因在45℃杂交120min可获得最佳结果。当纳米金偶联链霉抗生物素蛋白处理浓度为4μg/mL时,银的最佳增强时间为6min~8min。特异性测试显示这些病毒之间没有干扰,具有敏感性微阵列估计为25.0pg/μL。此外,即使在储存60天后,微阵列芯片仍然可以有效。
他们进一步使用微阵列芯片分析了113个与五种猪病毒相关的临床样品,与常规PCR/RT-PCR相比,微阵列芯片显示出100%的特异性和84%至100%的灵敏度。

